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关于肿瘤靶向基因突变

PANAGENE公司基于PNAClamp技术开发了一系列突变检测试剂盒，包括EGFR、KRAS、BRAF、PIK3CA、IDH1。

KRAS基因突变检测试剂盒

【产品介绍】

K-ras因编码21kD的ras蛋白又名p21基因。在ras基因中，K-ras对人类癌症影响最大，K - ras基因突变被发现在多种癌症中的作用类似分子开关，在肿瘤细胞生长以及血管生成等过程的信号传导通路中起着重要调控作用，K-ras基因突变发生在肿瘤恶变的早期，并且原发灶和转移灶的K-ras基因高度保持一致。K-ras基因的检测能够帮助早期症状不明显的结直肠癌患者尽早得知病情，实现癌症的早发现、早治疗，避免错过最佳治疗时机。

K-ras基因是野生型还是突变型，使传统意义上的结直肠癌被分成两种独立的疾病。只有野生型患者才建议接受EGFR抑制剂（如西妥昔单抗）治疗。突变型编码异常的蛋白，不受上游EGFR的信号影响，所以对抗EGFR治疗效果差。KRAS突变型结直肠癌患者约占40%，这类患者不能从抗EGFR治疗中获益，反而徒增不良反应危险和治疗费用。筛选出针对抗EGFR靶向治疗药物有效的患者，可帮助医生选择对肿瘤病人最有效的治疗方法，从而真正实现肿瘤病人的个体化治疗。

【检测原理】

PNA Clamp™ EGFR突变检测试剂盒是基于PNA的实时PCR Clamp™技术。该技术依赖PNA探针的两个重要特性。第一，PNA只能与完全配对的互补DNA链杂交。只要出现突变，即使是单一碱基错配，PNA就不能与互补的DNA链结合。第二，PNA的寡聚体本身不能被DNA聚合酶识别，从而不会充当PCR引物。它仅作为一个序列选择工具，阻止随后野生型的PCR扩增。

如果模板中目的基因发生了突变并因此出现了错配，使得DNA/PNA双链结合不稳定，这样DNA模板链就可以正常扩增，使发生突变的样本在实时PCR中得到阳性扩增产物，而野生型基因的扩增受到抑制。

本试剂盒的突变检测位点如下：

【适用样本】

Ø石蜡包埋组织样本

Ø胸腔积液

Ø新鲜血浆

Ø细胞学样本

Ø新鲜组织活体组织切片

【仪器要求】

公司	型号
Bio-Rad	CFX 96
Roche	Light cycler 480Ⅱ
Qiagen	Rotor-Gene Q
ABI	ABI7500
ABI	ABI7900

【技术特点】

Ø操作简便快捷——通过实时荧光PCR+PNA Clamp技术，2h即可获得多达数十个样本的检测结果。

Ø专利技术——采用PANAGENE公司先进的PNA Clamp技术，检测效果优于传统测序法和ARMS法等。

Ø灵敏度高——能测出0.1-1%的DNA突变。

Ø选择性好——可在混有野生型基因组DNA情况下，检测出1-0.1％的突变基因，是测序方法的25倍-250倍。

【订购信息】

产品名称	货号		规格
KRAS突变检测试剂盒	PNAC-1002		25Tests/盒

【参考文献】

1. Choi et al., Frequency of KRAS, BRAF, and PIK3CA mutations in advanced colorectal cancers: Comparison of peptide nucleic acid-mediated PCR and direct sequencing in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. Pathol Res Pract 207 (12):762-8, 2011.

2. Yoon et al., K-ras Gene Mutation in Non-Small Cell Lung Cancer. J Lung Cancer 1(1):55-59, 2002.

3. Beau-Faller et al., Detection of K-Ras mutations in tumour samples of patients with non-small cell lung cancer using PNA-mediated PCR clamping. British Journal of Cancer 100(6): 985 – 992, 2009.

4. Chang et al., Fast simultaneous detection of K-RAS mutations in colorectal cancer. BMC cancer 9:179, 2009.

5. Dabritz et al., Detection of Ki-ras mutations in tissue and plasma samples of patients with pancreatic cancer using PNA-mediated PCR clamping and hybridisation probes. British Journal of Cancer 92(2): 405-412, 2005.

6. Behn et al., Facilitated detection of oncogene mutations from exfoliated tissue material by a PNA-mediated `enriched PCR' protocol. J. Pathol 190(1):69-75, 2000.

7. Hilger et al., The Ras-Raf-MEK-ERK Pathway in the Treatment of Cancer. Onkologie 25(6): 511-518, 2002.

8. Bachireddy et al., Getting at MYC through RAS. Clin Cancer Res 11(12):4278-4281, 2005.